猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建
  • 【摘要】

    本研究根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRES MCSA MCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5ORF6基因阅读框架,并在基因起始密码子前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF5ORF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r.以病毒细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5ORF6基因,ORF5ORF6PCR产物和pIRES分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5ORF6... 展开>>本研究根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRES MCSA MCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5ORF6基因阅读框架,并在基因起始密码子前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF5ORF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r.以病毒细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5ORF6基因,ORF5ORF6PCR产物和pIRES分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5ORF6.经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了转移载体pIRES-ORF5ORF6.测得的ORFSORF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99%和100%,仍属北美洲型.构建成功的转移栽体pIRES-ORF5ORF6可作为防治PRRS的核酸疫苗,并可作为转移栽体在哺乳动物细胞中同时翻译表达两个蛋白,为进一步为PRRS的防治提供亚单位疫苗打下基础. 收起<<

  • 【作者】

    李俊  王金宝  袁小远  崔尚金  李曦  符芳  周艳君 

  • 【作者单位】

    山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100

  • 【会议名称】

    山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会

  • 【会议时间】

    2007-09-18

  • 【会议地点】

    济南

  • 【主办单位】

    中国畜牧兽医学会   山东省畜牧兽医学会

  • 【语种】

    chi

  • 【关键词】

    猪场防疫  核酸疫苗  病毒鉴定  基因表达