利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因
  • 【DOI】

    10.7524/AJE.1673-5897.20171212001

  • 【摘要】

    β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶(β-carotene-15,15′-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因.本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究.分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外... 展开>>β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶(β-carotene-15,15′-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因.本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究.分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sgRNA识别位点,体外转录制备sgRNA并与Cas9 mRNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sgRNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体.本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料. 收起<<

  • 【作者】

    李文龙  冯永永  李凯彬  聂湘平 

  • 【作者单位】

    暨南大学生命科学技术学院生态系/水生生物研究中心/中国水产科学研究院珠江水产研究所

  • 【刊期】

    生态毒理学报 ISTIC PKU 2018年3期

  • 【关键词】

    β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶  斑马鱼  CRISPR/Cas9技术  基因敲除 

  • 【基金项目】

    国家科技支撑计划项目:鱼类实验动物新资源的开发与标准化研究