抗菌作用和含不同质粒微生物代谢的热化学研究
  • 【摘要】

    本论文的研究是微量热法在细胞层次的应用.采用LKB2277生物活性检测仪,测定了含不同质粒的原核、真核微生物生长代谢的热谱,还研究了3种氟喹诺酮类药物、2系列过渡金属卟啉配合物对微生物代谢热谱的影响.结论如下: 1.含不同质粒的微生物代谢的热化学研究 (1)用流通法测量了尿嘧啶缺陷型酿酒酵母AY,及其3种转化子菌株的生长代谢热谱.尿嘧啶缺陷型酿酒酵母AY在基本培养基中不生长,没有代谢热效应产生,而... 展开>>本论文的研究是微量热法在细胞层次的应用.采用LKB2277生物活性检测仪,测定了含不同质粒的原核、真核微生物生长代谢的热谱,还研究了3种氟喹诺酮类药物、2系列过渡金属卟啉配合物对微生物代谢热谱的影响.结论如下: 1.含不同质粒的微生物代谢的热化学研究 (1)用流通法测量了尿嘧啶缺陷型酿酒酵母AY,及其3种转化子菌株的生长代谢热谱.尿嘧啶缺陷型酿酒酵母AY在基本培养基中不生长,没有代谢热效应产生,而在葡萄糖蛋白胨培养基和丰富营养培养基(YPD)中生长,并且在YPD中生长最好;向基本培养基中加入尿嘧啶后,AY能够生长,而且随着尿嘧啶浓度的增加,其生长速率常数增大;经质粒转化的3个菌株均能在基本培养基中生长,代谢热谱各不相同. 用停流法测量了大肠杆菌HB101及其4种转化子生长代谢的热谱,以及氨苄青霉素和氯霉素的影响,来自古生菌盐生盐杆菌R1染色体的三个DNA片段在大肠杆菌HB101均能启动氯霉素抗性基因表达,启动活性RM13> RM07> RM08. 结论是来自古生菌盐生盐杆菌R1染色体的RM07片段不仅在原核微生物大肠杆菌中具有启动子功能,而且在真核微生物酵母菌中也有启动子活性,这暗示在盐生盐杆菌中可能具有原核-真核双重功能的启动子. (2)用安瓿法测量了苏云金杆菌及其2株转化子菌株的代谢热谱.结果表明热谱中不同的阶段与苏云金杆菌的生长及产芽胞期分别对应,并且不同菌株热谱的差异与它们含质粒情况相关.通过选择不同的培养方法,进行微量热研究,为检测微生物外源基因的表达提供了一条新途径. 以上研究结果表明热谱能够反映相似菌株遗传特征的差异,且热谱的差异与转入质粒的结构、功能密切相关. 2.抗菌药物对微生物的抑制作用的热化学研究 (1)使用安瓿法对2个系列取代金属卟啉配合物对大肠杆菌生长代谢的影响进行了研究.发现其中编号为Mn-Por4b的金属卟啉配合物能较好的抑制大肠杆菌生长,并进一步用荧光光谱研究了其与牛血清白蛋白BSA的相互作用. (2)对喹诺酮类药物对大肠杆菌和金葡菌的抑制作用的热化学研究表明,从热动力学分析的结果出发,得到的药物对微生物的MIC与文献报道的生物学常用方法得到的结论基本一致.用荧光光谱研究了芦氟沙星RFLX与牛血清白蛋白BSA的相互作用. 以上结果表明,将微量热法应用于药物QSAR研究,有很好的应用前景,结合光谱学方法可进一步研究药物作用的分子机制. 3.LKB2277计算机数据采集系统的建立 微量热数据采用笔式记录仪记录虽然简单,但是给数据处理造成的不便很明显.购买成品采集系统成本较高,而且LKB数据采集速度不需很快,所以,结合对仪器多年的使用经验,我们建立了8通道、分辨率为0.1mV的数据采集系统.经过实验,结果完全满足要求,现在已经正式替代了笔式记录仪,给研究工作带来了很大的方便. 收起<<

  • 【作者】

    高振霆 

  • 【学科专业】

    物理化学

  • 【授予学位】

    硕士

  • 【授予单位】

    武汉大学

  • 【导师姓名】

    刘义

  • 【学位年度】

    2002

  • 【语种】

    chi

  • 【关键词】

    微量热%热动力学%微生物%启动子%药物